一种快速构建蛋白质突变体毕赤酵母表达文库的方法及其应用
河南省科学院生物研究所有限责任公司 河南省科学院
2021-06-08
蛋白质突变体 毕赤酵母 聚合酶链式 饱和醋酸钠 酵母转化法 博来霉素 碱基突变率 基因突变率
本发明涉及快速构建蛋白质突变体毕赤酵母表达文库的方法及其应用,可有效解决快速构建蛋白质突变体毕赤酵母表达文库,实现定向选择所需性质优化酶的问题,方法是,将目的基因构建到毕赤酵母载体pGAPZα系列载体中,构建质粒;进行聚合酶链式反应,得PCR产物,PCR产物加入饱和醋酸钠和乙醇,离心,沉淀室温晾干,再加入无菌去离子水溶解,按照酵母转化法将PCR产物电转化至毕赤酵母GS115感受态细胞中,涂布在含博来霉素的YPDS培养基平板上筛选阳性克隆,提取酵母基因组DNA,再对PCR产物进行测序,计算碱基突变率、基因突变率,实现快速构建蛋白质突变体毕赤酵母表达文库,本发明方法易操作,省时省力,工作效率高,应用面广,经济和社会效益巨大.
