耐热性α-半乳糖苷酶突变体的筛选及酶学性质研究
河南省科学院生物研究所有限责任公司 河南省工业酶工程技术研究中心 棕榈生态城镇发展股份有限公司
2023-05-15
α-半乳糖苷酶 耐温性 重组质粒pGAPZαA-Gal27A 保留酶活比 酶学性质
研究旨在改造株链球菌来源的α-半乳糖苷酶基因Gal27A，获得耐热性高的突变体。在常规PCR体系中加入不同水平的MnCl<sub>2</sub>，将基因克隆至载体pGAPZαA并成功构建表达酶产物的重组质粒pGAPZαA-Gal27A。将线性化的重组质粒电转至毕赤酵母GS115，在含有100 g/L博来霉素的YPDS平板上筛选耐热性提高的突变体，通过pNPG的方法测定重组酶的酶学性质为最适温度65℃，最适pH值6.5,Ag<sup>2+</sup>、Hg<sup>2+</sup>对重组酶的酶学活性具有明显的抑制作用，Cu<sup>2+</sup>对重组酶的酶活性具有促进作用。研究表明，试验成功构建耐热α-半乳糖苷酶高效表达菌株29和54，在55℃保温10 min与同等条件下的野生型进行对比，加热前后的保留酶活比的增幅大于45%。
